apolipoprotein E/apoE CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400860-ACT

APOE kodiert Apolipoprotein E (apoE), ein sezerniertes lipidgebundenes Protein, das den Transport von Cholesterin und Triglyzeriden durch Interaktionen mit Mitgliedern der LDL-Rezeptorfamilie sowie Heparansulfat-Proteoglykanen vermittelt. ApoE ist zentral für die Assemblierung und Clearance von Lipoproteinpartikeln und beeinflusst die zelluläre Lipidaufnahme, -umverteilung und homöostatische Signalgebung in Hepatozyten, Makrophagen und Gliazellen. Im Nervensystem moduliert apoE die Aufrechterhaltung synaptischer Strukturen, neuroinflammatorische Antworten und Proteostase-Wege, die die Handhabung von Amyloid-β beeinflussen. Genetische und expressionsbedingte Unterschiede in APOE sind stark mit Dyslipidämie und Neurodegeneration assoziiert, was APOE zu einem wichtigen Ziel für mechanistische Studien des Lipidstoffwechsels und der Immun‑Lipid‑Kommunikation im Gehirn macht.

apolipoprotein E/apoE Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen APOE-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

apolipoprotein E/apoE Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des APOE-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der APOE-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen apolipoprotein E/apoE-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native APOE-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von apolipoprotein E/apoE-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des apolipoprotein E/apoE-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem APOE-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.