apoF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407655-ACT

O APOF humano codifica a apolipoproteína F (apoF), um fator circulante associado a lipoproteínas que modula o transporte de lipídios no plasma e a remodelação de lipoproteínas. A apoF está ligada à biologia das partículas de HDL e LDL e influencia as reações de troca de lipídios e o processamento de lipoproteínas mediado por receptores, que moldam a distribuição de colesterol na circulação. Por meio desses processos, o APOF é estudado no contexto da homeostase lipídica sistêmica e dos mecanismos de doenças cardiometabólicas, incluindo vias de risco associadas à dislipidemia. Sua expressão e impacto funcional também são relevantes em modelos de metabolismo lipídico hepático, nos quais a produção e a depuração de lipoproteínas são determinantes-chave dos perfis lipídicos.

apoF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de APOF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

apoF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus APOF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição APOF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de apoF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus APOF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de apoF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via apoF em células tumorais com expressão de APOF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.