APOBEC3B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401700-ACT

APOBEC3B codifica uma desaminase de citidina que edita DNA de fita simples ao converter citosina em uracilo, atuando na defesa antiviral intrínseca e na restrição de retroelementos. Sua atividade interage com processos de replicação e reparo do DNA, incluindo respostas ao estresse replicativo e o processamento mutagênico de lesões, moldando assim padrões de mutação em todo o genoma. A expressão desregulada de APOBEC3B está associada a um aumento da carga mutacional somática e a assinaturas mutacionais características de APOBEC em múltiplos tipos de tumor. Como resultado, APOBEC3B é amplamente estudada em vias que controlam a estabilidade genômica, a sinalização imune inata e a adaptação impulsionada por mutações.

APOBEC3B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de APOBEC3B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

APOBEC3B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus APOBEC3B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição APOBEC3B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de APOBEC3B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus APOBEC3B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de APOBEC3B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via APOBEC3B em células tumorais com expressão de APOBEC3B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.