Plasmide CRISPR d'Activation (h) ApoA-V: sc-402213-ACT

L’APOA5 humain code l’apolipoprotéine A‑V (ApoA‑V), une apolipoprotéine sécrétée à expression prédominante hépatique, qui module l’homéostasie des triglycérides plasmatiques en régulant le métabolisme des lipoprotéines de très basse densité (VLDL) et en augmentant l’hydrolyse des triglycérides dépendante de la lipoprotéine lipase. ApoA‑V participe aux voies de transport et de clairance des lipoprotéines, en influençant le traitement des particules remnants et leur captation hépatique. Les variations génétiques ou une expression altérée d’APOA5 sont fortement associées à l’hypertriglycéridémie et à des phénotypes plus larges de dyslipidémie, reliant cet axe à la biologie du risque cardiométabolique. À ce titre, APOA5 est fréquemment étudié dans le cadre de la gestion des lipides par les hépatocytes, des réponses au jeûne/à l’alimentation et des réseaux transcriptionnels qui gouvernent le métabolisme lipidique.

ApoA-V Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de APOA5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ApoA-V Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus APOA5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription APOA5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ApoA-V. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus APOA5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ApoA-V au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ApoA-V dans les cellules tumorales présentant une expression de APOA5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.