apoA-IV Double Nickase Plasmid (h): sc-402217-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das apoA-IV Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- apoA-IV Double-Nickase-Plasmid (h) und apoA-IV Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf APOA4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: apoA-IV: sc-374543
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
apoA-IV Double Nickase Plasmid (h) | sc-402217-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
apoA-IV Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402217-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APOA4 kodiert Apolipoprotein A‑IV (apoA‑IV), ein im Darm gebildetes, lipidassoziiertes Apolipoprotein, das während der Aufnahme von Nahrungsfetten zusammen mit Chylomikronen und HDL‑ähnlichen Partikeln sezerniert wird. apoA‑IV trägt zum Remodeling von Lipoproteinen und zum reversen Cholesterintransport bei und beeinflusst den Stoffwechsel triglyceridreicher Lipoproteine über Interaktionen mit Enzymen und Transferproteinen, die den Lipidfluss im Plasma regulieren. Über diese Aktivitäten verknüpft es die intestinale Lipidverarbeitung mit der systemischen Lipidhomöostase und mit entzündlichen Signalwegen, die mit atherosklerotischen Prozessen assoziiert sind. Variationen in der Expression oder Funktion von APOA4 wurden im Kontext von Dyslipidämie, kardiometabolischen Merkmalen und lipidgetriebenen Entzündungszuständen untersucht, die für Mechanismen vaskulärer und metabolischer Erkrankungen relevant sind.
apoA-IV Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des APOA4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von APOA4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die APOA4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit APOA4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.