Particules Lentivirales d'Activation (h) Apelin: sc-401548-LAC

L’APLN humain code l’apéline, un ligand peptidique sécrété du récepteur APJ (APLNR) qui régule le tonus vasculaire, l’angiogenèse, l’homéostasie hydrique et la signalisation métabolique. La liaison apéline–APLNR active des voies couplées aux protéines G, notamment PI3K/AKT, ERK/MAPK et AMPK, influençant la fonction endothéliale, la contractilité du muscle lisse et les réponses de survie cellulaire. Dans des contextes pertinents pour la maladie, une signalisation de l’apéline altérée a été associée au remodelage cardiovasculaire, à l’hypertension pulmonaire, aux réponses à l’ischémie et aux dysfonctionnements métaboliques, faisant d’APLN un nœud utile pour étudier la communication cellule–cellule au sein des microenvironnements vasculaires et adipeux. L’expression de l’apéline est également sensible à l’hypoxie et aux signaux inflammatoires, ce qui soutient les investigations sur les programmes transcriptionnels d’adaptation au stress.

Les particules d'activation lentivirales Apelin (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de APLN dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Apelin (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription APLN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Apelin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif APLN ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.