Plásmido Doble Nickase (h) Apaf-1: sc-401291-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Apaf-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Apaf-1 (h) y el plásmido de doble nickasa Apaf-1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a APAF1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Apaf-1 Anticuerpo (5E11): sc-65891
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Apaf-1 | sc-401291-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Apaf-1 | sc-401291-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APAF1 codifica el factor activador de proteasas apoptóticas 1 (Apaf-1), un andamiaje citosólico que inicia la vía intrínseca mitocondrial de la apoptosis al unirse al citocromo c y al dATP para ensamblar el apoptosoma. Este complejo recluta y activa la caspasa iniciadora-9, lo que conduce a la activación posterior de las caspasas-3/7, la fragmentación del ADN y el desmantelamiento controlado de la célula. Apaf-1 integra señales de estrés derivadas de la permeabilización de la membrana externa mitocondrial e interactúa con la regulación de la familia BCL-2 y con respuestas al daño asociadas a p53. La expresión o función desregulada de APAF1 se ha vinculado con umbrales apoptóticos alterados en biología del cáncer y con fenotipos de pérdida celular relevantes para la neurodegeneración y los trastornos del desarrollo.
Apaf-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus APAF1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de APAF1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de APAF1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con APAF1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.