AP4A Hydrolase Double Nickaseプラスミド (h): sc-407028-NIC

NUDT2はヒトのAp4A加水分解酵素をコードしており、ジアデノシン四リン酸（Ap4A）および関連するジヌクレオシドポリリン酸を加水分解するNudixファミリー酵素である。Ap4Aの分解回転を制御することで、NUDT2はヌクレオチド恒常性と、細胞内の「アラーモン」シグナル伝達を介したストレス応答経路に影響を与え、転写プログラム、RNA代謝、細胞周期進行に関わる。文献では、NUDT2活性の変化が増殖能、DNA損傷応答、炎症性シグナル伝達ネットワークの変動と関連づけられており、ヒト細胞における状況依存的なシグナルカスケードの再編成を研究する上で重要である。Ap4A濃度はタンパク質—ヌクレオチド相互作用や下流のキナーゼ／アダプターを介するシグナルに影響し得るため、NUDT2を撹乱することは、ヌクレオチドを介した細胞状態遷移の制御機構を解明するのに有用である。

AP4A Hydrolase ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NUDT2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NUDT2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NUDT2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NUDT2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。