ANT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400680

Visão geral

SLC25A5 codifica a translocase de nucleotídeos de adenina 2 (ANT2), um transportador da membrana interna mitocondrial que troca ADP e ATP entre a matriz e o citosol, acoplando a fosforilação oxidativa à demanda energética celular. A ANT2 contribui para a homeostase do potencial de membrana mitocondrial e está funcionalmente ligada a vias que regulam a bioenergética, o equilíbrio redox e a sobrevivência celular, incluindo a transição de permeabilidade e a sinalização apoptótica. Como uma isoforma humana amplamente expressa, com regulação dependente do contexto, a ANT2 é frequentemente estudada em estados proliferativos e em remodelação metabólica, nos quais mudanças no fluxo de ATP/ADP influenciam o crescimento e as respostas ao estresse. A desregulação do transporte mitocondrial de nucleotídeos e da atividade da família ANT está associada a fenótipos de disfunção mitocondrial e tem sido investigada em contextos de pesquisa sobre metabolismo do câncer e sobre doenças neuromusculares e neurodegenerativas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ANT2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SLC25A5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SLC25A5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SLC25A5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ANT2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SLC25A5 para a investigação da sinalização de ANT2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SLC25A5 críticos para a função ANT2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SLC25A5 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ANT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ANT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SLC25A5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ANT2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ANT2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SLC25A5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SLC25A5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.