ANKRD22 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-416874-LAC

Il gene umano **ANKRD22** codifica una proteina contenente ripetizioni di anchirina, implicata in reti di interazioni proteina–proteina che influenzano il controllo della crescita cellulare e l’adattamento metabolico. Le variazioni di espressione riportate nei diversi tipi di tumore suggeriscono che ANKRD22 possa essere associato a segnali proliferativi e a programmi di risposta allo stress, con potenziali intersezioni con vie che regolano l’attività mitocondriale, l’organizzazione del citoscheletro e la regolazione trascrizionale. In quanto proteina a ripetizioni di anchirina, ANKRD22 è in grado di modulare il crosstalk tra vie di segnalazione fungendo da impalcatura per complessi regolatori, piuttosto che agire come enzima. Queste caratteristiche rendono ANKRD22 un bersaglio utile per analizzare la regolazione genica e fenotipi dipendenti dal contesto nella biologia del cancro e nelle transizioni di stato cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale ANKRD22 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ANKRD22 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ANKRD22 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ANKRD22, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ANKRD22. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ANKRD22 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.