ANKRD22 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-416874-LAC

O ANKRD22 humano codifica uma proteína contendo repetições de anquirina, implicada em redes de interação proteína–proteína que influenciam o controlo do crescimento celular e a adaptação metabólica. Alterações de expressão relatadas em diferentes tipos de tumor sugerem que o ANKRD22 pode estar associado a sinalização proliferativa e a programas de resposta ao stress, potencialmente intersectando vias que regulam a atividade mitocondrial, a organização do citoesqueleto e a regulação transcricional. Como proteína com repetições de anquirina, o ANKRD22 está numa posição favorável para modular a comunicação entre vias ao atuar como plataforma (scaffold) de complexos regulatórios, em vez de funcionar como uma enzima. Estas características tornam o ANKRD22 um alvo útil para analisar a regulação génica e fenótipos dependentes do contexto na biologia do cancro e em transições de estado celular.

As Partículas de Ativação Lentivirais ANKRD22 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ANKRD22 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ANKRD22 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ANKRD22, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ANKRD22. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ANKRD22 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.