Ameloblastin Plasmide Double Nickase (h): sc-403086-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ameloblastin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Ameloblastin Double Nickase Plasmid (h) e il Ameloblastin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AMBN. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Ameloblastin Antibody (H-2): sc-271012
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ameloblastin Plasmide Double Nickase (h) | sc-403086-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ameloblastin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403086-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AMBN codifica l’ameloblastina, una proteina secreta della matrice dello smalto espressa dagli ameloblasti, che contribuisce alla formazione dello smalto regolando l’organizzazione della matrice extracellulare, la deposizione dei minerali e l’adesione all’interfaccia tra ameloblasti e matrice. L’ameloblastina partecipa a programmi di sviluppo che coordinano la polarità delle cellule epiteliali, la differenziazione e il rimodellamento della matrice durante la morfogenesi dentale, e i suoi prodotti di processamento possono influenzare la segnalazione cellula–matrice. L’alterazione della funzione di AMBN è associata a difetti dello smalto e a cambiamenti nel comportamento degli ameloblasti, e la deregolazione di AMBN viene utilizzata come marcatore negli studi sulla differenziazione odontogenica e sulle patologie correlate. Queste caratteristiche rendono AMBN un locus utile per indagare la biologia della matrice extracellulare, i processi di mineralizzazione e le interazioni epitelio–mesenchimali nella ricerca craniofacciale.
Ameloblastin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AMBN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AMBN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AMBN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AMBN interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.