AMBRA1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404108-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AMBRA1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AMBRA1 Double-Nickase-Plasmid (h) und AMBRA1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AMBRA1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: AMBRA1: sc-398204
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AMBRA1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404108-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AMBRA1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404108-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AMBRA1 (autophagy and beclin 1 regulator 1) kodiert ein Gerüstprotein, das den Beginn der Autophagie koordiniert, indem es den BECLIN1/PIK3C3-Komplex moduliert und Signale aus Nährstoff- und Stress-Signalwegen integriert. AMBRA1 ist außerdem an der ubiquitinabhängigen Proteostase und der Kontrolle des Zellzyklus beteiligt und trägt durch die Regulation der mitochondrialen Qualitätskontrolle sowie der Apoptose-assoziierten Signalgebung zur zellulären Homöostase bei. Eine Fehlregulation von AMBRA1-gekoppelten Autophagie-Netzwerken wurde mit veränderter neuronaler Entwicklung und tumorrelevanten Prozessen in Verbindung gebracht, was AMBRA1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Stressadaptation und Proteostase-Ungleichgewichten in menschlichen Zellen macht. Als Autophagie-Regulator mit breiter Vernetzung über verschiedene Signalwege hinweg wird AMBRA1 häufig in Modellen der Neurobiologie, des Stoffwechsels und der Signalgebung in Krebszellen untersucht.
AMBRA1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AMBRA1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AMBRA1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AMBRA1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AMBRA1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.