Plasmide CRISPR/Cas9 KO alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 (h): sc-401939

Présentation

ATP1A2 code la sous-unité catalytique α2 de la Na⁺/K⁺‑ATPase, une ATPase de type P de la membrane plasmique qui maintient les gradients intracellulaires de Na⁺ et de K⁺ en couplant l’hydrolyse de l’ATP au transport ionique. Ce gradient électrochimique soutient le potentiel de membrane, l’équilibre osmotique, le transport actif secondaire et l’homéostasie du Ca²⁺ via l’échange Na⁺/Ca²⁺, influençant ainsi l’excitabilité et la signalisation dans les tissus électriquement actifs. L’activité d’ATP1A2 s’inscrit à l’interface de voies qui régissent la mise en tampon des ions par les neurones et les cellules gliales, la transmission synaptique et les réponses cellulaires au stress lié aux déséquilibres ioniques. Des perturbations génétiques et fonctionnelles d’ATP1A2 sont associées à des phénotypes neurologiques, notamment la migraine hémiplégique familiale et des tableaux apparentés comportant crises et/ou ataxie, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des troubles de l’excitabilité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ATP1A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ATP1A2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ATP1A2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ATP1A2 pour l'étude de la signalisation de alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ATP1A2 essentiels à la fonction de alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ATP1A2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ATP1A2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 plasmide HDR (h) et le alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ATP1A2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ATP1A2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.