Alix Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422154

Descripción general

Pdcd6ip codifica ALIX, un adaptador multifuncional que acopla la remodelación de membranas al tráfico endosomal mediante interacciones con componentes de ESCRT, incluidas las proteínas CHMP4, y con socios como TSG101. En células de ratón, ALIX contribuye a la biogénesis de los cuerpos multivesiculares, la liberación de exosomas, la abscisión citocinética y la reparación de la membrana plasmática, y puede influir en la señalización vinculada a la apoptosis a través de sus redes de unión. La actividad de ESCRT dependiente de ALIX también es aprovechada durante la gemación de virus envueltos y regula el recambio de receptores de membrana, lo que vincula a Pdcd6ip con vías que controlan la señalización celular y la proteostasis. La desregulación del tráfico mediado por ESCRT/ALIX se ha asociado con neurodegeneración, biología tumoral y patogénesis inmunitaria y viral en sistemas experimentales, lo que convierte a Pdcd6ip en un nodo útil para estudios mecanísticos de la dinámica de membranas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Alix (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pdcd6ip en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pdcd6ip junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pdcd6ip tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Alix.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pdcd6ip para la investigación de la señalización de Alix, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pdcd6ip críticos para la función de Alix
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pdcd6ip para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Alix CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Alix CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pdcd6ip. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Alix (m) y el plásmido HDR Alix (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pdcd6ip para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pdcd6ip definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.