Plásmido CRISPR de Activación (h) Aldose Reductase: sc-401437-ACT

AKR1B1 codifica la aldosa reductasa humana, una oxidorreductasa dependiente de NADPH que cataliza la reducción de la glucosa y de otros aldehídos a sus alcoholes correspondientes. Es un punto de entrada clave de la vía de los polioles, ya que influye en el equilibrio redox intracelular mediante el consumo de NADPH y contribuye a las respuestas al estrés osmótico y oxidativo. La aldosa reductasa también participa en la desintoxicación de especies carbonílicas reactivas y de aldehídos derivados de la peroxidación lipídica, lo que vincula la actividad de AKR1B1 con la señalización del estrés celular y los procesos inflamatorios. La expresión o actividad desregulada de AKR1B1 se ha asociado con fenotipos de estrés metabólico y complicaciones relevantes para la diabetes, así como con contextos más amplios de daño oxidativo y lesión tisular.

Aldose Reductase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AKR1B1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Aldose Reductase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AKR1B1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AKR1B1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Aldose Reductase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AKR1B1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Aldose Reductase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Aldose Reductase en células tumorales con expresión de AKR1B1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.