ALDH1L2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406648

Übersicht

ALDH1L2 kodiert eine mitochondriale Aldehyddehydrogenase, die als 10‑Formyltetrahydrofolat‑Dehydrogenase fungiert und damit den Folat‑Ein‑Kohlenstoff‑Stoffwechsel sowie die Redoxhomöostase innerhalb der Mitochondrien unterstützt. Durch die Regulation des Formyl‑THF‑Umsatzes und NADP(H)-gekoppelter Reaktionen beeinflusst ALDH1L2 die Kapazität der Nukleotidbiosynthese, das mitochondriale oxidative Gleichgewicht und zelluläre Antworten auf metabolischen Stress. Störungen des mitochondrialen Ein‑Kohlenstoff‑Flusses können anabole Anforderungen und den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies verändern – Prozesse, die in proliferativen und stressadaptierten Zellzuständen häufig umprogrammiert sind. Entsprechend wird ALDH1L2 im Kontext metabolischer Umprogrammierung, mitochondrialer Funktion und krankheitsassoziierter Veränderungen folatabhängiger Signal- und Stoffwechselwege untersucht.

Das ALDH1L2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ALDH1L2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ALDH1L2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ALDH1L2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ALDH1L2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ALDH1L2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ALDH1L2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ALDH1L2-Exone abzielen, die für die ALDH1L2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ALDH1L2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ALDH1L2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ALDH1L2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ALDH1L2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ALDH1L2 HDR-Plasmid (h) und ALDH1L2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ALDH1L2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ALDH1L2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.