Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406757

Visão geral

ALDH5A1 codifica a desidrogenase do semialdeído succínico (SSADH), uma enzona mitocondrial dependente de NAD+ que catalisa a oxidação do semialdeído succínico a succinato, ligando o catabolismo do GABA ao ciclo do ácido tricarboxílico (TCA). Ao controlar o fluxo através do desvio do GABA, o ALDH5A1 ajuda a regular o equilíbrio redox celular, o metabolismo mitocondrial e a renovação de neurotransmissores em tecidos neurais. A disrupção da atividade da SSADH está associada ao acúmulo de metabólitos derivados do GABA e a alterações na sinalização inibitória, e o ALDH5A1 tem sido estudado no contexto de erros inatos do metabolismo que afetam o sistema nervoso. Essas características tornam o ALDH5A1 um alvo útil para investigar a intercomunicação metabólica entre a função mitocondrial e as vias de neurotransmissores.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ALDH5A1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ALDH5A1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ALDH5A1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ALDH5A1 para a investigação da sinalização de Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ALDH5A1 críticos para a função Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ALDH5A1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ALDH5A1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ALDH5A1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ALDH5A1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.