Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405313

Übersicht

Humanes ALDH3A2 (Fettsäurealdehyd-Dehydrogenase, FALDH) ist ein NAD-abhängiges Enzym, das aliphatische Aldehyde mittlerer und langer Kettenlänge zu den entsprechenden Fettsäuren oxidiert und so die Anreicherung reaktiver Lipidaldehyde begrenzt, die während des Lipidstoffwechsels und bei oxidativem Stress entstehen. Es ist ein zentraler Bestandteil des Abbaus von Fettalkoholen und Sphingolipiden, einschließlich der Degradation von Fettsäurealdehyden, die aus dem Umsatz von Plasmalogenen und Etherlipiden hervorgehen. Durch die Kontrolle der Aldehydbelastung trägt ALDH3A2 zur Homöostase der Membranlipide und zum zellulären Redoxgleichgewicht bei. Loss-of-Function-Varianten sind mit dem Sjögren–Larsson-Syndrom assoziiert und werden im Kontext neurokutaner Pathologie sowie lipidvermittelter zellulärer Toxizität untersucht.

Das Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ALDH3A2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ALDH3A2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ALDH3A2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ALDH3A2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ALDH3A2-Exone abzielen, die für die Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ALDH3A2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ALDH3A2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2 HDR-Plasmid (h) und Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ALDH3A2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ALDH3A2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.