Plásmido CRISPR de Activación (m) Akt1: sc-419071-ACT

Akt1 de ratón codifica AKT1, una quinasa de serina/treonina que actúa como efector central de la señalización de PI3K para coordinar la supervivencia celular, el metabolismo de la glucosa, la síntesis de proteínas y la progresión del ciclo celular. Tras su activación aguas abajo de receptores tirosina quinasa y de las vías de insulina/IGF, AKT1 fosforila dianas que regulan la actividad de mTORC1, los factores de transcripción FOXO y procesos dependientes de GSK3, moldeando el crecimiento anabólico y las respuestas al estrés. La actividad de Akt1 influye en la remodelación del citoesqueleto y la migración mediante la comunicación cruzada con la señalización de MAPK y de adhesiones focales. La desregulación de la señalización de AKT1 está ampliamente implicada en programas de crecimiento oncogénico, resistencia a la insulina y fenotipos inflamatorios, lo que la convierte en un nodo clave para el estudio de vías en modelos murinos de enfermedad.

Akt1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Akt1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Akt1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Akt1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Akt1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Akt1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Akt1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Akt1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Akt1 en células tumorales con expresión de Akt1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.