AIP5 Double Nickase Plasmid (h): sc-403772-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AIP5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AIP5 Double-Nickase-Plasmid (h) und AIP5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf WWP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: AIP5: sc-390897
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AIP5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403772-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AIP5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403772-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WWP1 kodiert die humane E3-Ubiquitin-Protein-Ligase AIP5, ein HECT-Domänen-Enzym, das zahlreiche Substrate ubiquitiniert und dadurch Proteinstabilität, intrazellulären Transport sowie die Stärke von Signalantworten reguliert. Über die Erkennung von PPxY-Motiven mittels seiner WW-Domänen trägt AIP5 zur Feinabstimmung von Signalwegen bei, die Zellwachstum, Polarität und Stressantworten steuern, darunter die Modulation rezeptornaher Signalübertragung und der Abbau regulatorischer Proteine. Eine fehlregulierte WWP1/AIP5-Aktivität wird mit veränderter Ubiquitin-Homöostase und aberranten Signalprogrammen in Verbindung gebracht, die an onkogener Transformation und Entwicklungsphänotypen beteiligt sind. Entsprechend wird WWP1 häufig untersucht, um zu verstehen, wie ubiquitinvermittelte Proteostase in menschlichen Zellen mit Proliferation, Migration und der Umprogrammierung von Signalwegen zusammenspielt.
AIP5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des WWP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von WWP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die WWP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit WWP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.