Plasmide CRISPR/Cas9 KO AIM1 (h): sc-410680

Présentation

AIM1 (« absent dans le mélanome 1 ») code une protéine associée au cytosquelette, impliquée dans l’organisation de structures riches en actine et le maintien de l’architecture cellulaire. Elle a été reliée à la régulation de la forme cellulaire, de l’adhésion et du comportement migratoire via ses effets sur la dynamique du cytosquelette et les réseaux de signalisation associés. Une expression altérée d’AIM1 ou des perturbations génomiques touchant ce gène ont été rapportées dans de nombreux types de tumeurs, ce qui étaye son intérêt comme cible de recherche dans les études de transformation, d’invasion et de phénotypes métastatiques. AIM1 est également étudié dans le contexte de la différenciation de lignée et de l’organisation tissulaire, où le remodelage du cytosquelette est central aux transitions d’état cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AIM1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AIM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AIM1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AIM1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AIM1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AIM1 pour l'étude de la signalisation de AIM1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AIM1 essentiels à la fonction de AIM1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AIM1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AIM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le AIM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AIM1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AIM1 plasmide HDR (h) et le AIM1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AIM1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AIM1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.