AHRR CRISPR Activation Plasmid (h): sc-412812-ACT

Humanes AHRR (Aryl-Hydrocarbon-Rezeptor-Repressor) kodiert einen bHLH-PAS-Transkriptionsregulator, der eine negative Rückkopplungskontrolle der Signalübertragung des Aryl-Hydrocarbon-Rezeptors (AHR) vermittelt. Durch Konkurrenz um ARNT und die Bindung an Xenobiotic-Response-Elemente dämpft AHRR AHR-gesteuerte Transkriptionsprogramme, die den Xenobiotika-Metabolismus, entzündliche Signalwege, Reaktionen auf oxidativen Stress sowie die zelluläre Differenzierung beeinflussen. Veränderte AHRR-Aktivität und epigenetische Regulation wurden mit fehlregulierten Entgiftungswegen und immunmodulatorischen Zuständen in Verbindung gebracht, was AHRR zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung umweltabhängiger Genregulation macht. In der biomedizinischen Forschung wird AHRR häufig in Kontexten wie epithelialer Homöostase, Gefäßbiologie und tumorassoziierter transkriptioneller Reprogrammierung untersucht, in denen der Aktivitätsgrad des AHR-Signalwegs den Phänotyp prägen kann.

AHRR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AHRR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

AHRR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AHRR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AHRR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen AHRR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AHRR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von AHRR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des AHRR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AHRR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.