Plasmide CRISPR/Cas9 KO AGXT (m): sc-419052

Présentation

Le gène murin **Agxt** code l’alanine–glyoxylate aminotransférase (AGXT), une enzyme peroxysomale dépendante du PLP qui convertit le glyoxylate en glycine et relie le catabolisme des acides aminés à la détoxification du glyoxylate. Cette activité contribue à l’homéostasie métabolique hépatique en limitant la formation d’oxalate et en intégrant le flux redox et le flux de substrats peroxysomaux avec le métabolisme mitochondrial et cytosolique. L’altération de la fonction d’AGXT est associée à une accumulation de glyoxylate et à une surproduction d’oxalate, des phénotypes qui modélisent des voies impliquées dans des perturbations métaboliques de type hyperoxalurie. **Agxt** constitue donc une cible utile pour étudier la biologie des peroxysomes, le stress oxydant induit par les métabolites et les relations génotype–métabolisme dans les systèmes murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AGXT (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Agxt dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Agxt, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Agxt à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AGXT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Agxt pour l'étude de la signalisation de AGXT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Agxt essentiels à la fonction de AGXT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Agxt pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AGXT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le AGXT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Agxt. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AGXT plasmide HDR (m) et le AGXT (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Agxt pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Agxt définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.