aggrecan CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400760

概要

ACANはアグリカン（aggrecan）をコードしており、アグリカンはコンドロイチン硫酸を多く含む大型のプロテオグリカンです。アグリカンはヒアルロン酸およびリンクプロテインと結合することで、軟骨細胞外マトリックスの水和した骨格（バックボーン）を形成し、圧縮荷重に対する抵抗性を可能にします。アグリカンのターンオーバーは、軟骨細胞の同化（アナボリック）プログラムと、細胞外での異化的なプロテオリシスにより協調的に制御されており、ADAMTSファミリーのアグリカナーゼによる切断や、組織の生体力学特性を形作るマトリックス再構築経路がこれに含まれます。ACANの発現やアグリカンのプロセシングが乱れると軟骨の恒常性が破綻し、変性性および発生・成長過程の骨格表現型に関与することが示されているため、細胞外マトリックスの構築とメカノバイオロジーを研究する上での重要なハブとなります。そのためACANは、軟骨細胞分化、成長板生物学、軟骨マトリックス組み立ての研究において、マーカーとしても機能的決定因子としても広く用いられています。

aggrecan CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるACAN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ACAN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ACANのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、aggrecanタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、aggrecanシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ACAN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• aggrecanの機能に不可欠なACANエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ACANゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• aggrecan CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびaggrecan CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ACAN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  aggrecan HDRプラスミド（h）および aggrecan HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはACANホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のACAN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。