ADRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400802

Übersicht

PLIN2 kodiert das adipose differentiation-related protein (ADRP), ein Hüllprotein von Lipidtröpfchen, das die Speicherung neutraler Lipide sowie die Dynamik der Biogenese, Expansion und des Abbaus von Lipidtröpfchen reguliert. ADRP koordiniert Wechselwirkungen zwischen Lipidtröpfchen und zellulären Membranen und beeinflusst Stoffwechselprozesse wie den Umgang mit Fettsäuren, lipotoxische Stressantworten und die Kommunikation zwischen Organellen in Hepatozyten, Adipozyten und Makrophagen. Aufgrund seiner Rolle im intrazellulären Lipidtransport und in der Lipidspeicherung wird PLIN2 häufig im Zusammenhang mit hepatischer Steatose, adipositasassoziierter Stoffwechselstörung und der Bildung von Schaumzellen während der Atherogenese untersucht. Eine veränderte PLIN2-Expression wird zudem in Krebserkrankungen mit lipidtropfenreichen Phänotypen erforscht, in denen Programme der Lipidspeicherung Proliferation und die Anpassung an oxidativen Stress unterstützen können.

Das ADRP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PLIN2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PLIN2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PLIN2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ADRP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PLIN2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ADRP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PLIN2-Exone abzielen, die für die ADRP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PLIN2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ADRP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ADRP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PLIN2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ADRP HDR-Plasmid (h) und ADRP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PLIN2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PLIN2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.