Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADRP (h): sc-400802

Présentation

PLIN2 code la protéine liée à la différenciation adipocytaire (ADRP), une protéine de revêtement des gouttelettes lipidiques qui régule le stockage des lipides neutres ainsi que la dynamique de la biogenèse, de l’expansion et du renouvellement des gouttelettes lipidiques. ADRP coordonne les interactions entre les gouttelettes lipidiques et les membranes cellulaires et influence des processus métaboliques tels que la gestion des acides gras, les réponses au stress lipotoxique et la communication entre organites dans les hépatocytes, les adipocytes et les macrophages. En raison de son rôle dans le trafic et le stockage intracellulaires des lipides, PLIN2 est fréquemment étudié dans le contexte de la stéatose hépatique, des dysfonctions métaboliques associées à l’obésité et de la formation de cellules spumeuses lors de l’athérogenèse. Des altérations de l’expression de PLIN2 sont également étudiées dans des cancers présentant des phénotypes riches en gouttelettes lipidiques, où les programmes de stockage lipidique peuvent soutenir la prolifération et l’adaptation au stress oxydant.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADRP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PLIN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PLIN2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PLIN2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADRP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PLIN2 pour l'étude de la signalisation de ADRP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PLIN2 essentiels à la fonction de ADRP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PLIN2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADRP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ADRP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PLIN2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADRP plasmide HDR (h) et le ADRP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PLIN2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PLIN2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.