AdoMetDC Double Nickase Plasmid (h): sc-404514-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AdoMetDC Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AdoMetDC Double-Nickase-Plasmid (h) und AdoMetDC Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AMD1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: AdoMetDC: sc-166970
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AdoMetDC Double Nickase Plasmid (h) | sc-404514-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AdoMetDC Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404514-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AMD1 kodiert die humane S‑Adenosylmethionin-Decarboxylase (AdoMetDC), ein geschwindigkeitsbestimmendes Enzym der Polyaminbiosynthese, das decarboxyliertes S‑Adenosylmethionin erzeugt, welches für die Bildung von Spermidin und Spermine benötigt wird. Über die Regulation der intrazellulären Polyamin-Pools beeinflusst AdoMetDC die Translation, die Chromatinorganisation, die DNA-Replikation und den Fortschritt des Zellzyklus und verknüpft die AMD1‑Aktivität damit mit Wachstumskontrolle und zellulären Stressantworten. Eine dysregulierte Polyaminhomöostase sowie veränderte AMD1‑Expression oder -Aktivität wurden mit proliferativen Phänotypen und metabolischer Reprogrammierung in unterschiedlichen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was AMD1 als mechanistischen Knotenpunkt für die Analyse von Signal- und Stoffwechselwegen nahelegt. Als metabolischer „Gatekeeper“ wird AMD1 häufig im Zusammenhang mit der Ornithin-Decarboxylase sowie Polyamin‑Abbau- und ‑Transportwegen untersucht, um homöostatische Rückkopplungen und nachgelagerte Effekte auf die Genexpression zu kartieren.
AdoMetDC Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AMD1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AMD1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AMD1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AMD1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.