ADM Double Nickase Plasmid (h): sc-402779-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ADM Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ADM Double-Nickase-Plasmid (h) und ADM Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ADM abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ADM: sc-53153
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ADM Double Nickase Plasmid (h) | sc-402779-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADM Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402779-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Adrenomedullin (ADM) ist ein sezerniertes Peptidhormon, das aus einem größeren Präproprotein prozessiert wird und in Gefäß- und endokrinen Geweben breit exprimiert ist. Über die Signalübertragung via den Calcitonin-Rezeptor-ähnlichen Rezeptor (CALCRL) im Komplex mit RAMP2 oder RAMP3 aktiviert ADM cAMP/PKA sowie nachgeschaltete MAPK- und PI3K-gekoppelte Signalwege, die Vasodilatation, die Funktion der endothelialen Barriere, angiogene Antworten und die Anpassung an zellulären Stress regulieren. ADM wird durch Hypoxie und entzündliche Signale induziert und trägt zum vaskulären Remodelling, zur Flüssigkeitshomöostase und zur Kommunikation zwischen Immunzellen und Stromazellen bei. Eine Fehlregulation der ADM-Signalgebung wurde mit kardiometabolischen Funktionsstörungen, Entzündungszuständen und tumorassoziierter Angiogenese in Verbindung gebracht, was ADM als mechanistischen Knotenpunkt in der Forschung zur Mikroumgebung und Gefäßbiologie stützt.
ADM Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ADM-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ADM abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ADM-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ADM-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.