ADM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419009

Übersicht

Adrenomedullin (ADM) ist ein sezerniertes vasoaktives Peptid, das durch das Mausgen *Adm* kodiert wird und hauptsächlich über den Calcitoninrezeptor-ähnlichen Rezeptorkomplex mit RAMP2 oder RAMP3 signalisiert, wodurch cAMP/PKA-abhängige Antworten ausgelöst werden. Es trägt zur Regulation des Gefäßtonus, zur Funktion der endothelialen Barriere, zur Angiogenese sowie zur Flüssigkeits- und Elektrolythomöostase bei und kann inflammatorische Signalwege in Endothel- und Immunzellen modulieren. Die ADM-Aktivität überschneidet sich mit hypoxie-antwortenden Programmen und stressadaptiven Signalwegen, die die Gewebeperfusion und das Remodeling beeinflussen. Eine fehlregulierte ADM-Expression oder -Signalübertragung wurde mit der Biologie kardiometabolischer und entzündlicher Erkrankungen in Verbindung gebracht, einschließlich hypertonieassoziierter Gefäßdysfunktion und veränderter mikrovaskulärer Antworten.

Das ADM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Adm-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Adm-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Adm nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ADM-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Adm-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ADM-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Adm-Exone abzielen, die für die ADM-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Adm-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ADM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ADM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Adm-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ADM HDR-Plasmid (m) und ADM HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Adm-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Adm-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.