ADM CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402779-ACT

Das humane Gen **ADM** codiert **Adrenomedullin**, ein sezerniertes Peptidhormon, das in vaskulären und epithelialen Geweben breit exprimiert wird und die Vasodilatation, die Integrität der endothelialen Barriere sowie die Flüssigkeitshomöostase reguliert. Über die Signalübertragung via den Calcitonin-Rezeptor-ähnlichen Rezeptor (**CALCRL**) in Kopplung mit **RAMP2** oder **RAMP3** aktiviert ADM **cAMP/PKA** sowie nachgeschaltete **MAPK-** und **PI3K–AKT**-Signalwege, um Angiogenese, zelluläres Überleben und Entzündungsantworten zu modulieren. ADM reagiert auf Hypoxie und zellulären Stress und trägt zu adaptiven Programmen bei, die das vaskuläre Remodeling und die Gewebeperfusion mitgestalten. Eine fehlregulierte ADM-Expression wurde mit kardiovaskulären Funktionsstörungen, sepsisassoziierter vaskulärer Leckage und tumorassoziierter Angiogenese in Verbindung gebracht, was ADM zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der Endothelbiologie und der Signalübertragung im Mikromilieu macht.

ADM Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADM-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ADM Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADM-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADM-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ADM-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADM-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ADM-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ADM-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADM-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.