ADH7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2): sc-419006-KO-2

Übersicht

Adh7 kodiert die Alkoholdehydrogenase 7 (ADH7), eine NAD-abhängige Oxidoreduktase, die zum Stoffwechsel von Retinoiden sowie einer Reihe von Alkohol- und Aldehyd-Substraten beiträgt und dadurch das zelluläre Redoxgleichgewicht und die Entgiftungskapazität beeinflusst. In Mausgeweben, in denen es exprimiert wird, kann die ADH7-Aktivität mit Schritten der Umwandlung von Retinol zu Retinal zusammenfallen, die in die Retinsäure-Signalgebung einspeisen – einen Signalweg, der zentral für Differenzierungsprogramme und die Homöostase von Epithelgeweben ist. Eine veränderte Aldehydverarbeitung und ein gestörter Retinoidstoffwechsel sind häufig mit oxidativen Stressantworten und fehlregulierter Wachstumskontrolle verknüpft, weshalb Adh7 einen nützlichen Ansatzpunkt darstellt, um metabolische Beiträge zu Gewebeumbau und krankheitsrelevanten Phänotypen zu untersuchen. Da der Alkohol-/Aldehydstoffwechsel zudem die Lipid- und Entzündungssignalgebung beeinflusst, kann eine Störung von Adh7 genutzt werden, um die Wechselwirkungen zwischen metabolischen Enzymen und Transkriptionsprogrammen nachgeschalteter, retinoidregulierter Netzwerke zu untersuchen.

Das ADH7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Adh7-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Adh7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Adh7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ADH7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Adh7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ADH7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Adh7-Exone abzielen, die für die ADH7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Adh7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ADH7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ADH7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Adh7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ADH7 HDR-Plasmid (m) und ADH7 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Adh7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Adh7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.