Adh1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419005

Descripción general

Adh1 codifica la alcohol deshidrogenasa 1, una oxidorreductasa citosólica que cataliza la interconversión de alcoholes y aldehídos de cadena corta dependiente de NAD+/NADH, contribuyendo al equilibrio redox celular y al metabolismo intermediario. En tejidos de ratón, la actividad de ADH1 sustenta el metabolismo del alcohol y de xenobióticos y se integra con vías que controlan la desintoxicación de aldehídos, las respuestas al estrés oxidativo y la homeostasis de lípidos/carbonilos. La alteración del manejo de alcoholes/aldehídos es relevante en modelos de lesión hepática, inflamación y disfunción metabólica, donde los cambios en las proporciones NADH/NAD+ y la acumulación de aldehídos reactivos pueden influir en la función mitocondrial y la señalización. Como enzima metabólica con amplia especificidad de sustrato, Adh1 se examina con frecuencia en estudios sobre capacidad de desintoxicación y adaptación metabólica específica de tejido.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Adh1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Adh1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Adh1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Adh1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Adh1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Adh1 para la investigación de la señalización de Adh1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Adh1 críticos para la función de Adh1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Adh1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Adh1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Adh1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Adh1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Adh1 (m) y el plásmido HDR Adh1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Adh1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Adh1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.