ACTR-I Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418974

Descripción general

Acvr1 codifica el receptor de activina A tipo I (ACTR-I/ALK2), un receptor quinasa de serina/treonina de tipo I de la superfamilia TGF-β que transmite señales de ligandos BMP y activina hacia los SMAD1/5/8 y programas de transcripción dependientes de SMAD. En células de ratón, ACTR-I contribuye a la regulación del patrón de desarrollo, la diferenciación osteogénica y condrogénica, y la homeostasis tisular, integrando la señalización del complejo receptor con reguladores de retroalimentación dependientes del contexto. La alteración de la vía de ACVR1 se asocia con una señalización BMP desregulada y decisiones aberrantes de destino celular, por lo que es relevante para estudios de biología esquelética, remodelación tipo fibrótica y el crosstalk de transducción de señales con las vías MAPK y PI3K/AKT. El análisis experimental de la función de Acvr1 respalda trabajos mecanísticos sobre la actividad quinasa del receptor, la especificidad por ligando y las redes transcripcionales aguas abajo en contextos fisiológicos y de modelos de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ACTR-I (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Acvr1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Acvr1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Acvr1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ACTR-I.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Acvr1 para la investigación de la señalización de ACTR-I, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Acvr1 críticos para la función de ACTR-I
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Acvr1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ACTR-I CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ACTR-I CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Acvr1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ACTR-I (m) y el plásmido HDR ACTR-I (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Acvr1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Acvr1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.