ACTG1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400006-ACT

ACTG1 kodiert das zytoplasmatische Gamma-Aktin, einen zentralen Bestandteil des Aktin-Zytoskeletts, das Zellform, kortikale Spannung und mechanische Stabilität unterstützt. Durch die dynamische Filamentassemblierung und Interaktionen mit Aktin-bindenden Proteinen trägt ACTG1 zu Prozessen wie Zellmigration, Adhäsion, Endozytose und Zytokinese bei und ist in Rho-GTPase-regulierte Signalwege des Zytoskelett-Remodelings eingebunden. Eine veränderte ACTG1-Dosierung oder -Funktion kann die Zytoskelettorganisation und die Mechanotransduktion stören und dadurch Gewebeentwicklung und zelluläre Homöostase beeinflussen. Beim Menschen ist ACTG1 an aktinbezogenen Erkrankungen beteiligt, die sensorische und entwicklungsbezogene Phänotypen betreffen, und ist damit relevant für Studien zur Zytoskelettdynamik und zu krankheitsassoziierten zellulären Stressantworten.

ACTG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ACTG1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ACTG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ACTG1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ACTG1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ACTG1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ACTG1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ACTG1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ACTG1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ACTG1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.