Plásmido CRISPR de Activación (h) ACSVL5: sc-401578-ACT

El gen humano SLC27A1 codifica ACSVL5 (FATP1), una acil‑CoA sintetasa de ácidos grasos de cadena larga que cataliza la activación dependiente de ATP de ácidos grasos de cadena larga a acil‑CoA, acoplando la captación de lípidos con su utilización metabólica intracelular. Al dirigir los ácidos grasos hacia la β‑oxidación, la biosíntesis de triglicéridos y fosfolípidos, y la dinámica de las gotículas lipídicas, ACSVL5 contribuye a modular el equilibrio energético celular y la remodelación de membranas. La actividad de SLC27A1 se integra con programas lipídicos regulados por PPAR e influye en el flujo de lípidos en mitocondrias y retículo endoplásmico (RE), vinculando la disponibilidad de nutrientes con la señalización metabólica. Una gestión alterada de los ácidos grasos en la que participa SLC27A1 se ha asociado con fenotipos metabólicos y con vías de estrés celular impulsadas por lípidos, lo que la hace relevante para estudios de sensibilidad a la insulina, inflamación y reprogramación metabólica en modelos de enfermedad.

ACSVL5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC27A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ACSVL5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC27A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC27A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ACSVL5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC27A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ACSVL5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ACSVL5 en células tumorales con expresión de SLC27A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.