Plasmide Double Nickase (m) ACSVL1: sc-424084-NIC

Slc27a2 code l’acyl‑CoA synthétase 1 des acides gras à très longue chaîne (ACSVL1), une enzyme associée au réticulum endoplasmique et aux peroxysomes qui active les acides gras à longue et à très longue chaîne en thioesters d’acyl‑CoA. Cette réaction constitue un point d’entrée clé des voies d’utilisation des lipides, reliant l’absorption des acides gras à la β‑oxydation, au remodelage lipidique et à l’homéostasie énergétique, et elle favorise la coordination métabolique entre peroxysomes et mitochondries. Dans les cellules murines, l’activité d’ACSVL1 influence les pools intracellulaires de lipides bioactifs capables de moduler la signalisation PPAR et des programmes transcriptionnels métaboliques plus larges. Une dérégulation de la prise en charge des acides gras à très longue chaîne est pertinente pour les études de la stéatose hépatique, de la résistance à l’insuline et de phénotypes neurométaboliques, où l’accumulation lipidique et le stress oxydant sont examinés sur le plan mécanistique.

ACSVL1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Slc27a2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Slc27a2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Slc27a2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Slc27a2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.