ACSL5 Plasmide Double Nickase (m): sc-436628-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ACSL5 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ACSL5 Double Nickase Plasmid (m) e il ACSL5 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Acsl5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ACSL5 Antibody (A-2): sc-365478
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ACSL5 Plasmide Double Nickase (m) | sc-436628-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACSL5 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-436628-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino *Acsl5* codifica per l’acil-CoA sintetasi della famiglia a catena lunga, membro 5 (ACSL5), un enzima associato ai mitocondri e al reticolo endoplasmatico che attiva gli acidi grassi a catena lunga convertendoli in acil-CoA. Questa reazione indirizza gli acidi grassi verso la β-ossidazione, la biosintesi di trigliceridi e fosfolipidi e il rimodellamento della composizione lipidica di membrana, influenzando così l’energetica cellulare e le risposte allo stress lipotossico. L’attività di ACSL5 interseca vie che controllano la funzione mitocondriale, il metabolismo ossidativo e la dinamica delle goccioline lipidiche, e può modulare la segnalazione infiammatoria attraverso cambiamenti nei mediatori lipidici. Un’espressione o un’attività deregolata di ACSL5 è stata associata a fenotipi metabolici, inclusi la steatosi epatica e processi correlati alla resistenza all’insulina, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla biologia delle malattie metaboliche.
ACSL5 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Acsl5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Acsl5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Acsl5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Acsl5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.