ACSL4 Lentiviral Activation Particles (m2): sc-424503-LAC-2

Das murine Gen Acsl4 kodiert die Acyl‑CoA‑Synthetase der Long‑Chain‑Familie, Mitglied 4 (ACSL4), ein lipidmetabolisierendes Enzym, das mehrfach ungesättigte langkettige Fettsäuren wie Arachidonsäure zu Acyl‑CoAs aktiviert und dadurch die Zusammensetzung membranständiger Phospholipide sowie die nachgeschaltete Eicosanoid‑Biosynthese prägt. ACSL4 wirkt an der Schnittstelle von Fettsäureaufnahme, Phospholipid‑Remodeling und Redox‑Homöostase und wird aufgrund seiner Rolle bei der Bildung oxidierbarer, PUFA‑haltiger Phospholipide häufig als molekularer Determinant der Ferroptose‑Empfindlichkeit herangezogen. Eine veränderte ACSL4‑Aktivität wurde in Modellen der Neurodegeneration, metabolischer Dysfunktionen, Entzündung sowie krebsrelevanter Signalwege mit gestörter Lipidsignalisierung und oxidativen Stressantworten in Verbindung gebracht. Eine auf Acsl4 ausgerichtete Geneditierung ermöglicht mechanistische Untersuchungen des Lipidflusses, des ferroptotischen Zelltods und des Membran‑Remodelings über verschiedene Zelltypen hinweg und in vivo in Mausmodellen.

ACSL4 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Acsl4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ACSL4 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Acsl4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ACSL4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Acsl4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.