Plasmide CRISPR/Cas9 KO Acrosin (m): sc-418952

Présentation

Le gène murin **Acr** code l’acrosine, une protéase à sérine de type trypsine stockée dans l’acrosome du spermatozoïde sous forme de zymogène, la proacrosine, puis activée lors de la réaction acrosomique. L’acrosine contribue au remodelage protéolytique au niveau de la tête du spermatozoïde et facilite la traversée de la zone pellucide, en s’intégrant aux processus qui régulent la capacitation des spermatozoïdes, l’exocytose acrosomique et les interactions entre les membranes des gamètes. Une perturbation de l’activité de l’acrosine est associée à des défauts de compétence fécondante et constitue un point d’entrée mécanistique pour l’étude de la biologie de la reproduction mâle. Dans le cadre plus large du réseau des protéases à sérine, l’acrosine offre un modèle d’activation régulée des zymogènes et de protéolyse associée à la matrice extracellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Acrosin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Acr dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Acr, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Acr à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Acrosin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Acr pour l'étude de la signalisation de Acrosin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Acr essentiels à la fonction de Acrosin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Acr pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Acrosin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Acrosin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Acr. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Acrosin plasmide HDR (m) et le Acrosin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Acr pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Acr définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.