Acrosin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-418952

Übersicht

Das murine Gen **Acr** kodiert **Akrosin**, eine trypsinähnliche Serinprotease, die im Akrosom des Spermiums als Zymogen **Proakrosin** gespeichert und während der Akrosomenreaktion aktiviert wird. Akrosin trägt zum proteolytischen Umbau am Spermienkopf bei und unterstützt das Durchdringen der **Zona pellucida**, wobei es mit Prozessen verzahnt ist, die die Spermienkapazitation, die akrosomale Exozytose und die Interaktionen der Gametenmembranen steuern. Eine Störung der Akrosinaktivität ist mit Defekten der Befruchtungskompetenz verbunden und dient als mechanistischer Ansatzpunkt zur Untersuchung der männlichen Reproduktionsbiologie. Als Teil des breiteren Serinprotease-Netzwerks ist Akrosin ein Modell für die regulierte Aktivierung von Zymogenen und für extrazelluläre Matrix-assoziierte Proteolyse.

Das Acrosin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Acr-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Acr-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Acr nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Acrosin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Acr-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Acrosin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Acr-Exone abzielen, die für die Acrosin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Acr-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Acrosin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Acrosin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Acr-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Acrosin HDR-Plasmid (m) und Acrosin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Acr-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Acr-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.