ACP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-418950

Übersicht

Acp2 kodiert die lysosomale saure Phosphatase 2 (ACP2), eine Hydrolase, die zum Umsatz von Phosphatestern im sauren Lumen der Lysosomen beiträgt. Die ACP2-Aktivität unterstützt den lysosomenabhängigen Abbau von Makromolekülen und ist mit endolysosomalem Transport, Autophagie sowie zellulären Nährstoff-Recyclingwegen verknüpft. Eine veränderte Funktion lysosomaler Phosphatasen kann die Homöostase von Organellen stören und ist für Mechanismen relevant, die bei lysosomaler Dysfunktion und neurodegenerationsbezogenen Phänotypen untersucht werden. In Mausmodellen eignet sich Acp2, um zu untersuchen, wie das Gleichgewicht lysosomaler Enzyme zelluläre Stressantworten, die Funktion von Immunzellen und die Gewebehomöostase beeinflusst.

Das ACP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Acp2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Acp2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Acp2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ACP2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Acp2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ACP2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Acp2-Exone abzielen, die für die ACP2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Acp2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ACP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ACP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Acp2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ACP2 HDR-Plasmid (m) und ACP2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Acp2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Acp2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.