Partículas Lentivirales de Activación (h) ACAT-1: sc-402300-LAC

ACAT1 codifica la acetil‑CoA acetiltransferasa 1 (ACAT‑1), una tiolasa mitocondrial que cataliza la condensación reversible de dos moléculas de acetil‑CoA para formar acetoacetil‑CoA, y contribuye a la utilización de cuerpos cetónicos y al catabolismo de aminoácidos de cadena ramificada. A través de su papel en el flujo mitocondrial de acetil‑CoA, ACAT‑1 ayuda a coordinar el metabolismo oxidativo, el equilibrio redox y la selección de sustratos bajo estrés nutricional. La desregulación de vías asociadas a ACAT1 se ha relacionado con errores congénitos del metabolismo de cuerpos cetónicos y aminoácidos, así como con estados metabólicos mitocondriales alterados relevantes para fenotipos del neurodesarrollo y neurometabólicos. La función de ACAT‑1 también se evalúa con frecuencia en estudios de remodelación metabólica en células cancerosas e inmunitarias, donde el direccionamiento del carbono mitocondrial influye en programas de proliferación y diferenciación.

Las partículas de activación lentiviral ACAT-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ACAT1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ACAT-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ACAT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ACAT-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ACAT1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.