ABR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407250

Descripción general

ABR (relacionado con BCR activo) codifica una proteína multidominio activadora de la actividad GTPasa de Rho (RhoGAP) que modula pequeñas GTPasas como RAC1 y CDC42, influyendo así en la dinámica del citoesqueleto de actina, la adhesión celular, la formación de ondulaciones de membrana (membrane ruffling) y el tráfico vesicular. A través de su actividad GAP y de sus funciones como andamiaje de señalización, ABR participa en vías que acoplan señales impulsadas por receptores con la remodelación del citoesqueleto y la motilidad celular. La alteración de la señalización de las GTPasas de la familia Rho regulada por ABR se ha asociado con fenotipos de proliferación y migración desregulados, relevantes para la transformación oncogénica y el comportamiento invasivo. ABR también se estudia en el contexto de la señalización de células inmunitarias y de procesos del neurodesarrollo, donde se requiere un control preciso de las GTPasas de la familia Rho.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ABR (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ABR en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ABR junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ABR tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ABR.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ABR para la investigación de la señalización de ABR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ABR críticos para la función de ABR
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ABR para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ABR CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ABR CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ABR. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ABR (h) y el plásmido HDR ABR (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ABR para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ABR definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.