Plásmido Doble Nickase (h) Abi-1: sc-417534-NIC

ABI1 codifica la proteína adaptadora Abl interactor 1 (Abi-1), un componente central del complejo regulador WAVE que conecta la señalización de Rac con la polimerización de actina mediada por Arp2/3. Mediante interacciones con quinasas ABL, aportes de la vía PI3K y señalización asociada a integrinas, Abi-1 coordina el rizado de membrana, la formación de lamelipodios, la endocitosis y la dinámica de adhesión célula–célula o célula–matriz. La alteración de la expresión de ABI1 o del cableado de su red se ha asociado con una remodelación desregulada del citoesqueleto y con desequilibrios de señalización en diversos contextos patológicos, incluidos fenotipos de migración e invasión relacionados con el cáncer. Como proteína andamiaje, Abi-1 actúa como un nodo mecanístico para estudiar cómo las vías de receptores y quinasas convergen en la morfogénesis dependiente de actina y en el tráfico intracelular.

Abi-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ABI1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ABI1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ABI1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ABI1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.