Abi-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-417534-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Abi-1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Abi-1 Double Nickase Plasmid (h) e il Abi-1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ABI1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Abi-1 Antibody (C-1): sc-398554
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Abi-1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-417534-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Abi-1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-417534-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABI1 codifica la proteina adattatrice Abl interactor 1 (Abi-1), componente centrale del complesso regolatorio WAVE che collega la segnalazione di Rac alla polimerizzazione dell’actina mediata da Arp2/3. Attraverso interazioni con le chinasi ABL, input della via PI3K e segnali associati alle integrine, Abi-1 coordina il ruffling di membrana, la formazione di lamellipodi, l’endocitosi e le dinamiche di adesione cellula–cellula o cellula–matrice. Alterazioni dell’espressione di ABI1 o del cablaggio della sua rete sono state associate a una deregolazione del rimodellamento del citoscheletro e dell’equilibrio della segnalazione in diversi contesti patologici, inclusi fenotipi di migrazione e invasione legati al cancro. In quanto proteina scaffold, Abi-1 funge da nodo meccanicistico per studiare come le vie recettoriali e chinasiche convergano sulla morfogenesi actina-dipendente e sul traffico intracellulare.
Abi-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ABI1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ABI1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ABI1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ABI1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.