Plasmide CRISPR/Cas9 KO ABCG1 (h): sc-401237

Présentation

ABCG1 (ATP-binding cassette, sous-famille G, membre 1) est un transporteur d’efflux du cholestérol et des phospholipides qui favorise l’export des lipides vers les HDL et contribue au maintien de la composition des membranes cellulaires et de l’homéostasie des stérols. Il agit en aval de la signalisation LXR/RXR et participe à la gestion du cholestérol par les macrophages, à la dynamique des gouttelettes lipidiques et au tonus inflammatoire des cellules myéloïdes. Une activité altérée d’ABCG1 a été associée à une dérégulation du métabolisme lipidique et à l’activation des cellules immunitaires, avec des implications pour la biologie de l’athérosclérose, l’inflammation métabolique et l’homéostasie du surfactant pulmonaire. Dans des modèles cellulaires humains, ABCG1 est souvent étudié pour son impact sur la formation de cellules spumeuses, les réponses cytokiniques et les interactions avec d’autres transporteurs ABC tels qu’ABCA1.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ABCG1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ABCG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ABCG1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ABCG1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ABCG1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ABCG1 pour l'étude de la signalisation de ABCG1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ABCG1 essentiels à la fonction de ABCG1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ABCG1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ABCG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ABCG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ABCG1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ABCG1 plasmide HDR (h) et le ABCG1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ABCG1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ABCG1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.