Plásmido CRISPR de Activación (h) ABCA4: sc-401830-ACT

ABCA4 codifica un transportador de la superfamilia ATP-binding cassette (ABC) que se expresa predominantemente en los fotorreceptores de la retina, donde se localiza en las membranas de los discos del segmento externo y participa en el ciclo visual. ABCA4 media el transporte dependiente de ATP de conjugados de retinoides, ayudando a eliminar la N-retinilideno-fosfatidiletanolamina y otros intermediarios relacionados para limitar la acumulación de bisretinoides citotóxicos como A2E. A través de su función en el manejo de retinoides, ABCA4 contribuye a la homeostasis de los fotorreceptores y se relaciona con vías que regulan el transporte de lípidos, el estrés oxidativo y las interacciones entre el epitelio pigmentario de la retina y los fotorreceptores. La desregulación o la actividad reducida de ABCA4 se asocia fuertemente con degeneraciones retinianas hereditarias, incluida la enfermedad de Stargardt y la distrofia cono-bastón relacionada con ABCA4, lo que la convierte en una diana clave para estudios mecanísticos de la patobiología retiniana.

ABCA4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ABCA4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ABCA4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ABCA4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ABCA4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ABCA4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ABCA4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ABCA4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ABCA4 en células tumorales con expresión de ABCA4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.