Partículas Lentivirales de Activación (h) ABCA13: sc-407004-LAC

ABCA13 codifica un transportador de la superfamilia ATP-binding cassette (ABC) de la subfamilia ABCA, que acopla la hidrólisis de ATP al movimiento transmembrana de lípidos y otros sustratos hidrofóbicos relacionados. Aunque su especificidad de sustrato exacta sigue siendo objeto de investigación, ABCA13 se ha implicado en la organización de los lípidos de membrana, el tráfico vesicular y procesos de homeostasis celular que influyen en la diferenciación epitelial y la biología de las barreras. La expresión y la variación genética de ABCA13 se han asociado con fenotipos alterados de manejo de lípidos y se han explorado en el contexto de la biología pulmonar y oncogénica, incluidas relaciones con el comportamiento tumoral y los mecanismos de enfermedades respiratorias. Estas características convierten a ABCA13 en una diana útil para estudiar redes de transporte de lípidos, dinámica de membranas y programas transcripcionales que modulan el estado celular.

Las partículas de activación lentiviral ABCA13 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ABCA13 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ABCA13 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ABCA13, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ABCA13. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ABCA13 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.