AANAT Plasmide Double Nickase (h): sc-403080-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AANAT Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AANAT Double Nickase Plasmid (h) e il AANAT Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AANAT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AANAT Plasmide Double Nickase (h) | sc-403080-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AANAT Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403080-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’AANAT (arylalkylamine N-acetiltransferasi) umana è l’enzima limitante la velocità nella biosintesi della melatonina, catalizzando l’acetilazione della serotonina a N-acetilserotonina all’interno della via metabolica del triptofano/indolamine. La sua attività è regolata in modo rigoroso dai segnali circadiani e dal pathway cAMP/PKA, inclusi la stabilizzazione dipendente dalla fosforilazione e interazioni che coordinano la produzione notturna di melatonina. Attraverso il controllo della melatonina e di intermedi indolaminici correlati, AANAT contribuisce alla tempistica sonno–veglia e neuroendocrina, alle risposte allo stress ossidativo e all’omeostasi metabolica. Alterazioni dell’espressione o della regolazione di AANAT sono state investigate in relazione alla perturbazione dei ritmi circadiani e a fenotipi legati al sonno, nonché in contesti di ricerca neuropsichiatrica e metabolica.
AANAT Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AANAT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AANAT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AANAT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AANAT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.