AANAT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418927

Descripción general

El gen **Aanat** de ratón codifica la arilalquilamina N-acetiltransferasa (AANAT), una enzima limitante de la velocidad en la biosíntesis de melatonina que cataliza la N-acetilación de la serotonina para formar N-acetilserotonina en la glándula pineal y otros tejidos. La actividad de AANAT está estrechamente regulada por señales circadianas mediante la vía de señalización cAMP/PKA, la estabilización dependiente de fosforilación y un control transcripcional coordinado, lo que vincula el metabolismo celular con la sincronización al ciclo luz–oscuridad. Al modular la melatonina y los intermediarios indolamínicos relacionados, **Aanat** influye en la regulación del ciclo sueño–vigilia, la fisiología estacional y la señalización neuroendocrina. La expresión o actividad desregulada de AANAT se ha asociado en sistemas experimentales con la alteración de los ritmos circadianos y con fenotipos modificados de estrés, estado de ánimo y metabolismo, lo que la convierte en un nodo útil para estudios centrados en vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO AANAT (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Aanat en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Aanat junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Aanat tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AANAT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Aanat para la investigación de la señalización de AANAT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Aanat críticos para la función de AANAT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Aanat para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido AANAT CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido AANAT CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Aanat. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AANAT (m) y el plásmido HDR AANAT (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Aanat para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Aanat definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.