A1BG CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403087-ACT

Alpha-1B-Glykoprotein (A1BG) kodiert ein sekretiertes Plasma-Glykoprotein aus der Immunglobulin-Superfamilie, das im Blutkreislauf in hoher Menge vorkommt und in zahlreichen Geweben nachweisbar ist. Obwohl seine genaue molekulare Funktion noch nicht vollständig geklärt ist, wird A1BG mit extrazellulären Protein-Protein-Interaktionen sowie der Modulation von Immun- und Entzündungsprozessen in Verbindung gebracht; zudem wurden Zusammenhänge mit oxidativem Stress und proteostasebezogener Signalgebung im extrazellulären Milieu beschrieben. Eine veränderte A1BG-Expression wurde in unterschiedlichen pathologischen Kontexten beobachtet, darunter metabolische und entzündliche Zustände sowie mehrere Krebsarten, was seine Nutzung als biomarkerassoziiertes Gen für mechanistische Studien unterstützt. In humanen Zellmodellen bietet die Perturbation von A1BG einen Ansatz, um Signalwege zu untersuchen, die Netzwerke sekretierter Glykoproteine, systemische Entzündung und tumorassoziierte mikroumgebungsabhängige Signalgebung steuern.

A1BG Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen A1BG-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

A1BG Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des A1BG-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der A1BG-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen A1BG-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native A1BG-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von A1BG-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des A1BG-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem A1BG-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.