Plasmide Double Nickase (m) 3PGDH: sc-433506-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) 3PGDH correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide 3PGDH Double Nickase (m) et le plasmide 3PGDH Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Phgdh. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: 3PGDH Antibody (B-1): sc-390610
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) 3PGDH | sc-433506-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) 3PGDH | sc-433506-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Phgdh* code la 3‑phosphoglycérate déshydrogénase (3PGDH), première enzyme et enzyme limitante de la voie phosphorylée de biosynthèse de la L‑sérine, qui détourne l’intermédiaire glycolytique 3‑phosphoglycérate vers la production de sérine et de glycine. En contrôlant la disponibilité en sérine, la 3PGDH influence le métabolisme à un carbone, la synthèse des nucléotides, l’homéostasie rédox et des programmes de biosynthèse lipidique qui soutiennent la prolifération et la différenciation. L’activité de *Phgdh* est donc étroitement liée à la reprogrammation métabolique et aux réponses au stress cellulaire dans des tissus à forte demande biosynthétique, notamment le système nerveux. Une altération de la fonction de PHGDH/3PGDH a été associée à des erreurs innées du métabolisme de la sérine ainsi qu’à des dépendances métaboliques observées dans certains états prolifératifs, ce qui fait de *Phgdh* un nœud utile pour étudier des circuits métaboliques pertinents pour la maladie.
3PGDH Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Phgdh dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Phgdh. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Phgdh. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Phgdh.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.