20S Proteasome β5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402449

概要

PSMB5は、20Sコアプロテアソームのβ5触媒サブユニットをコードしており、ユビキチン–プロテアソーム系によるATP依存的タンパク質分解に必須のキモトリプシン様活性を担います。このタンパク質分解経路は、タンパク質品質管理、MHCクラスI提示に向けた抗原プロセシング、ならびに細胞周期やストレス応答の主要制御因子のターンオーバーを調節します。プロテアソーム機能の変化は、プロテオスタシスの破綻、酸化ストレスおよび小胞体（ER）ストレスシグナル伝達の異常、NF-κB経路やアポトーシス経路の変化と関連づけられています。PSMB5はまた、増殖シグナルやプロテアソーム阻害に対する応答といった文脈でも研究されており、β5活性が細胞の感受性や耐性といった表現型に影響し得ます。

20S Proteasome β5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPSMB5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PSMB5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PSMB5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、20S Proteasome β5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、20S Proteasome β5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PSMB5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• 20S Proteasome β5の機能に不可欠なPSMB5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PSMB5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• 20S Proteasome β5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）および20S Proteasome β5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PSMB5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  20S Proteasome β5 HDRプラスミド（h）および 20S Proteasome β5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPSMB5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPSMB5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。